Ang ELISA kit ay batay sa solid phase ng antigen o antibody at enzyme labeling ng antigen o antibody. Ang antigen o antibody na nakagapos sa ibabaw ng solid carrier ay nagpapanatili pa rin ng kanyang immunological na aktibidad, at ang enzyme na may label na antigen o antibody ay nagpapanatili ng parehong immunological na aktibidad at aktibidad ng enzyme. Sa oras ng pagpapasiya, ang ispesimen na nasa ilalim ng pagsubok (kung saan sinusukat ang antibody o antigen) ay tumutugon sa antigen o antibody sa ibabaw ng solidong carrier. Ang antigen-antibody complex na nabuo sa solidong carrier ay pinaghihiwalay mula sa iba pang mga sangkap sa likido sa pamamagitan ng paghuhugas.
Ang mga antigen o antibodies na may label na enzyme ay idinagdag, na nagbubuklod din sa solidong carrier sa pamamagitan ng reaksyon. Sa oras na ito, ang dami ng enzyme sa solid phase ay nasa proporsyon sa dami ng substance sa specimen. Matapos idagdag ang substrate ng reaksyon ng enzyme, ang substrate ay na-catalyzed ng enzyme upang maging mga produktong may kulay. Ang halaga ng produkto ay direktang nauugnay sa dami ng nasubok na sangkap sa ispesimen, kaya ang pagsusuri ng husay o dami ay maaaring isagawa ayon sa lalim ng kulay.
Ang mataas na catalytic na kahusayan ng mga enzyme ay hindi direktang nagpapalaki sa mga resulta ng immune response, na ginagawang lubos na sensitibo ang assay. Maaaring gamitin ang ELISA upang matukoy ang mga antigen, ngunit maaari ding gamitin upang matukoy ang mga antibodies.
Mga pangunahing prinsipyo ng ELISA kit
Gumagamit ito ng tiyak na reaksyon ng antigen at antibody upang ikonekta ang bagay sa enzyme, at pagkatapos ay gumagawa ng reaksyon ng kulay sa pagitan ng enzyme at substrate para sa quantitative determination. Ang bagay na sinusukat ay maaaring antibody o antigen.
Mayroong tatlong reagents na kinakailangan sa pamamaraang ito ng pagpapasiya:
â Solid phase antigen o antibody (immune adsorbent)
â¡ Enzyme na may label na antigen o antibody (marker)
⢠substrate para sa enzyme action (color development agent)
Sa pagsukat, ang antigen (antibody) ay unang nakatali sa solid carrier, ngunit nananatili pa rin ang immune activity nito, at pagkatapos ay isang conjugate (marker) ng antibody (antigen) at enzyme ay idinagdag, na nagpapanatili pa rin ng orihinal nitong immune activity at enzyme. aktibidad. Kapag ang conjugate ay tumutugon sa antigen (antibody) sa solid carrier, ang kaukulang substrate ng enzyme ay idinagdag. Iyon ay, catalytic hydrolysis o REDOX reaksyon at kulay.
Ang lilim ng kulay na ginagawa nito ay proporsyonal sa dami ng antigen (antibody) na susukatin. Ang produktong may kulay na ito ay maaaring maobserbahan sa pamamagitan ng mata, optical mikroskopyo, electron mikroskopyo, ay maaari ding masukat sa pamamagitan ng spectrophotometer (enzyme label instrumento). Ang pamamaraan ay simple, maginhawa, mabilis at tiyak.